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    CD161,踟躕在成藥的十字路口(下)
    2021-04-20 訪問次數:182
    ? ? ? ?上期推送,我們給大家介紹了CD161和LLT1,并且講述了CD161在NK細胞上的調控模式以及腫瘤微環境的巨大挑戰。本期,我們會接著帶來CD161成藥性的挑戰以及CD161在T細胞尤其是CD8+的T細胞的病理機制。

    一、成藥性的挑戰
    ? ? ? ?考慮到以上困難,如果有CD161的研發管線,就非常值得借鑒,然而(圖9):
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    圖9 沒有公開信息表明,以CD161和LLT1為靶點的抗體,含有國際非專用名,并進入臨床研究了。

    圖10 沒有查到CD161抗體相關專利。但是其作為腫瘤治療靶點,已有若干申請,本圖舉例說明。
    ? ? ? ?目前,CD161更多的是作為免疫細胞亞群的標記信號,以表征細胞亞群在不同疾病治療中的變化。
    ? ? ? ?CD161/LLT1可能存在成藥的困難。分析原因,可能有:
    ? ? ? ?1. 阻斷結果的矛盾:阻斷對于NK細胞,可以釋放其免疫活性。然而對于T細胞,結果則相反,通過LLT1的阻斷實驗發現,在CD4+ CD8+的T細胞中,激活后的T細胞高表達CD161。不過,CD161也可能作為負反饋信號,卻缺少LLT1的結合,從而不能實現抑制。這需要調研相關病理情況。
    ? ? ? ?2. CD161和LLT1的結合能力較弱:KD約48μM,二元復合體的穩定性不強,阻斷活性不易判斷。參考NKG2A/CD94與HLA組成三元復合體,該三元復合體的結構可能更穩定,以進行拮抗活性抗體的篩選,是值得參考的。
    ? ? ? ?3. 結合表位:LLT1在體內受CLEC2D其他變體的干擾,表位難以選定。但是根據文獻報道,目前已存在的LLT1抗體,可以實現阻斷LLT1與CD161結合。
    ? ? ? ?而CD161的結合表位,與N糖修飾關聯可能性較大。如果存在靶向的抗體,N糖修飾的個體差異,可能導致抗體脫靶。另外,RSCB-PDB數據庫中已有兩者的結構數據,有助于我們預測復合體結合情況,比如https://www.rcsb.org/structure/5MGT(圖11A),https://www.rcsb.org/structure/5MGR(圖11B)??梢钥吹絅糖修飾在蛋白表位的位置。
    A. LLT1胞外域

    B. CD161胞外域

    圖11 LLT1和CD161胞外域的晶體結構。使用該數據,我們可以模擬兩個分子的結合。

    二、T細胞:向左,自身免疫;向右,腫瘤
    ? ? ? ?CD161在T細胞,尤其是CD8+的T細胞的病理機制,也具有巨大的潛力。
    ? ? ? ?有研究發現,北歐的多發性硬化癥(MS),與CD161在CD8+CD3+ T細胞中的異常過表達有關,血液中的CD161顯著高于健康人群(圖10)。CD161highCD8+CD3+ T細胞,伴隨高表達的IL-17,IL-12介導增殖,釋放IFN-γ。這些IFN-γ可能導致了MS患者大腦中的免疫損傷,以及異常的B細胞囊泡。
    ? ? ? ?之前提到,CD161的表達與IL-17的分泌有很強的相關性。IL-17作為信息溝通的橋梁,在T細胞調節的獲得性免疫,以及針對細胞外的細菌、真菌的急性炎癥響應,起到重要的作用。IL-17是CD3γδ+的T細胞,或者Th17,或者NKT,產生的效應細胞因子,可激活中性粒細胞,并將其招募到感染和炎癥的部位。IL-17也是調節B細胞效應的細胞因子,在抗病毒方面有積極作用。
    ? ? ? ?通常,我們認為MS與類風濕性關節炎(RA)類似,是一種自身免疫疾病。然而,CD161在其中的表現不同。MS患者中,CD161在CD8+的細胞毒性體細胞中,顯著高表達,而RA患者中,CD161在CD8+的細胞毒性體細胞中,顯著低表達(圖11)。
    ? ? ? ?類似的,在克郎氏癥中,也是CD4+的T細胞中,異常高表達CD39和CD161。

    圖12 CD161在MS患者中的異常高表達,可被IFN-β治療到低于正常水平。

    圖13 MS和RA中,CD8+或CD4+的T細胞上,CD161的陽性率近似(A、C)。然而,在CD8+的T細胞,通常認為是細胞毒性T細胞上,MS中CD161的表達顯著更高(B),CD4+的T細胞差異不大(D)。
    ? ? ? ?對肝癌組織及患者的血液樣本的研究,發現對CD8+PD1+的T細胞(具有細胞毒性),CD161+和CD161-的呈現了分布上的顯著差異,而這種差異可能與不同的演化線路有關。CD161+的T細胞,在腫瘤組織的比例低于正常組織,但是CD161-的T細胞降低的比例更高。CD161+的T細胞,具有更強的細胞毒性、增殖能力、腫瘤組織浸潤性(圖14)。
    ? ? ? ?這也預示著,激活CD161信號通路,而不是阻斷,可能更有利于抗腫瘤的治療。LLT1對CD161親和力不足,需要親和力更高的多肽、抗體。而激活型多肽、抗體的獲得,往往難于阻斷性抗體。

    圖14 CD161+的T細胞,不同于CD161-的T細胞,不依賴于LAG3-MHCII,具有更強的細胞毒性,增殖能力,以及浸潤腫瘤組織的能力。

    圖15 CD8+CD161+在感染(A)、腫瘤治療(B)、自身免疫(C)相關的機制。

    三、結尾
    ? ? ? ?CD161作為NK細胞的靶點,阻斷其與LLT1的結合,可以提高NK的細胞毒性。同時,CD161對細胞毒性T細胞的活性、記憶分化有正面作用,阻斷CD161反而減弱了免疫活性,不過,這種阻斷,在治療自身免疫疾病時,可以起到非常好的效果。因此,選擇CD161/LLT1阻斷型抗體的適應癥,需要考慮其免疫系統的細胞亞群的活性,是否適用于阻斷機制。
    ? ? ? ?然而,根據clinictrial的搜索結果,CD161更多的是作為臨床實驗中,細胞亞群表征的標志物,與CD25、CD69、CD56的應用比較接近。

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